Nuevo método de diagnóstico rápido frente al virus de la hepatitis C

El diagnóstico point of care, en español diagnóstico en el lugar de asistencia, permite llevar a cabo las pruebas del diagnóstico de hepatitis C en el mismo lugar donde está el paciente, sin necesidad de hacerlas en un laboratorio ni de trasladar a la persona fuera de su entorno. De esta manera, se facilita llegar a pacientes y colectivos que tienen dificultades para desplazarse a centros sanitarios, y se permite un diagnóstico más rápido y sencillo gracias al uso de técnicas menos complejas que las normalmente existentes en un hospital o centro de salud.

El estudio está firmado por las investigadoras del Laboratorio de Referencia para la
Investigación de Hepatitis Virales del CNM-ISCIII Sonia Arca de Lafuente y Verónica
Briz, junto a Ricardo Madrid, de la UCM. También participan investigadores del Área
de Enfermedades Infecciosas (CIBERINFEC) del Centro de Investigación Biomédica
en Red (CIBER) del ISCIII, junto a equipos de los hospitales de La Paz y La Princesa,
en Madrid, y la Universidad Pablo Olavide de Sevilla.

A pesar de que los niveles de prevalencia de infección activa por VHC en España
se encuentran entre los más bajos a nivel europeo, se estima que aún un número
importante de individuos desconocen su estado de infección, especialmente entre
las poblaciones más vulnerables. Además, a nivel mundial se producen aproximadamente un millón de nuevas infecciones por VHC cada año, con especial prevalencia en países en vías de desarrollo.

Con el objetivo de acercar el diagnóstico de VHC a las poblaciones de difícil acceso,
los investigadores han planteado un diseño de tipo POC, que permite realizar el
muestreo por punción capilar en el lugar de asistencia. La punción capilar es la
recolección de una muestra de sangre obtenida mediante un leve pinchazo en la
piel.

Más rápido, sencillo y accesible

El sistema funciona de la siguiente manera. Se ha desarrollado y validado un nuevo
sistema de detección para el VHC basado en el análisis de la muestra mediante una
técnica de amplificación de ácidos nucleicos conocida como LAMP (loop-mediated
isothermal amplification, en español amplificación isotérmica mediada por bucle).

Esta técnica se caracteriza por llevar a cabo una amplificación de los ácidos nucleicos en condiciones isotérmicas, característica que fundamenta su uso a nivel POC, ya que no requiere de equipamiento sofisticado ni personal altamente
formado, como por ejemplo sí sucedía en las pruebas clásicas por PCR ampliamente utilizadas durante la pandemia de covid-19.

Tras llevarse a cabo la punción digital, la muestra se somete a un proceso de lisis a temperatura ambiente en una solución de desarrollo propio, e inmediatamente es
amplificada mediante RT-LAMP, con un primer paso de transcripción reversa a
45oC, seguido de amplificación LAMP a 68oC. Así, en un tiempo inferior a 50
minutos desde la punción, los resultados diagnósticos son obtenidos por
fluorescencia.

Validación del estudio

La validación del estudio se ha llevado a cabo con un panel de 129 muestras de individuos con infección por VHC (116 muestras de suero y 13 muestras de sangre fresca, incluyendo los genotipos 1-4), junto a personas sanas (controles) e individuos con infección por virus de inmunodeficiencia humana (VIH), con el objetivo de determinar los parámetros diagnósticos del nuevo sistema.

Los resultados muestran una sensibilidad del 94%, una especificidad del 100% y un límite de detección de 3.26 log10UI/mL, correspondiente con 10-20 copias por reacción RT-LAMP.

Estos parámetros encajan en los requerimientos establecidos por la Asociación
Europea para el Estudio del Hígado (EASL) para sistemas de cribado de VHC, lo
que permitiría su implantación como parte de las estrategias para eliminar la hepatitis C como problema de salud pública.

En lo que respecta al equipamiento necesario, las temperaturas de incubación
requeridas pueden alcanzarse fácilmente con un baño termostatizado. Para la
lectura del resultado en el lugar de asistencia, se propone el empleo de lectores de
fluorescencia portátiles, como los existentes para el diagnóstico de malaria o de
infecciones por Mycobacterium tuberculosis.

Las autoras explican que este diseño “permite descentralizar el diagnóstico de la infección aguda por hepatitis C, acercando el diagnóstico a las poblaciones de difícil acceso y dando un paso más en la carrera por la eliminación de la hepatitis C como objetivo de la Organización Mundial de la Salud para el año 2030”.

Referencia del artículo:

Sonia Arca-Lafuente, Cristina Yépez- Notario, Pablo Cea-Callejo, Violeta Lara-Aguilar, Celia Crespo- Bermejo, Luz Martín-Carbonero, Ignacio de los Santos, Verónica
Briz, Ricardo Madrid. Development and validation of a new and rapid
molecular diagnostic tool based on RT-LAMP for Hepatitis C virus
detection at point-of-care. Methods, Volume 232, 2024, Pages 43-51,
ISSN 1046-2023. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39447941/